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        免疫球蛋白ELISA試劑盒在使用中有何要領可言

        發布時間: 2021-12-26  點擊次數: 149次
         
          免疫球蛋白ELISA試劑盒用于小鼠生物樣品中IgE定量測量的體外酶聯免疫吸附測定(ELISA)。在該測定中,樣品中存在的IgE與吸附到聚苯乙烯微量滴定孔表面的抗IgE抗體反應。通過洗滌除去未結合的蛋白質后,加入與辣根過氧化物酶(HRP)綴合的抗IgE抗體。這些酶標記的抗體與先前結合的IgE形成復合物。在另一洗滌步驟之后,通過加入顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)測定與免疫吸附劑結合的酶。
          本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠免疫球蛋白E(IgE)水平。用純化的小鼠免疫球蛋白E(IgE)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入免疫球蛋白E(IgE),再與HRP標記的免疫球蛋白E(IgE)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成醉終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白E(IgE)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠免疫球蛋白E(IgE)濃度。
          免疫球蛋白ELISA試劑盒的使用要領:
          1、操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
          2、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
          3、濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
          4、封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
          5、底物請避光保存。
          6、試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
          7、所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
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